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镍柱纯化蛋白为什么加pmsf和dtt

文章作者:程序开发 上传时间:2019-02-12

  加PMSF是因为PMSF是一种蛋白酶抑制剂,可以有效的抑制菌体裂解后的释放出的丝氨酸蛋白酶和巯基蛋白酶的活性。防止它们降解消化目标蛋白。需注意PMSF溶解于水溶液后自身会迅速降解,大约1小时会自身降解完毕即失去作用。需要每1小时补加一些新鲜的PMSF。

  加DTT是因为DTT是一种还原剂,可以打开蛋白质的二硫键,阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。避免His-tag被包裹在蛋白结构的内部导致目标蛋白不能结合镍柱。需注意DTT会还原镍柱上的镍离子,可能会造成镍离子的脱落而影响柱效。

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